26 июля 1914 г., полку снова пришлось отправиться в поход, на этот раз к западной границе, а 20 августа пересёк её юго-западнее Мазурских озёр. В начавшуюся Первую мировую войну полк вступил в составе 2-й армии Северо-Западного фронта. В 1914 г. 86-й пехотный полк участвовал в Восточно-Прусской, Варшавско-Ивангородской и Лодзинской операциях, летом 1915 г. – в боях под Ломжей, на реках Бобр, Неман и под Гродно. В марте 1916 г. полк участвовал в Нарочьской операции, понеся тяжелейшие потери, в июне-июле 1916 г. вёл бои на р. Стоход, а в июле был переведён в состав 8-й армии Юго-Западного фронта, в составе которой принял участие в знаменитом Брусиловском прорыве на Луцком направлении. В 1917 г. полк находился в составе войск 1-й армии Северного фронта. После февральских событий среди солдат полка, как и во многих других частях русской армии, начались революционные выступления. Был создан полковой комитет, солдаты несколько раз отказывались идти в атаку.